Metoda 1: Metoda de extracție (Metoda folosită în prezent în țara mea; are o puritate mai mică, dar oferă costuri de producție mai mici.)
Extracția soluției de oxitocină: Luați 100 g de pulbere pituitară posterioară uscată și 30 g de pulbere de cuarț, puneți-le într-o moară cu bile și adăugați apă distilată. Efectuați extracția de patru ori folosind aceeași procedură. Volumele de apă distilată adăugate pentru fiecare etapă sunt următoarele: 1,4 L pentru primele două extracții și 1,3 L pentru următoarele două. Fiecare extracție se efectuează timp de 45 de minute, urmată de centrifugare pentru a colecta lichidul; reziduul rămas este apoi supus extracției ulterioare. Cele patru extracte rezultate sunt combinate pentru a da soluția de oxitocină. În rezumat: Pulbere uscată de hipofizar posterior [Apă, Moara cu bile] → Extract de oxitocină → Separare cromatografică.
Luați 1.500 g de zeolit sintetic pre-tratat, adăugați 20 L dintr-o soluție de acid acetic 0,25% și-după agitare-turnați amestecul într-o coloană cu schimb-de ioni. Odată ce nivelul soluției de acid acetic a scăzut la un punct la 2-3 cm deasupra suprafeței patului de zeolit, introduceți imediat extractul de oxitocină. Menține un debit adecvat și colectează eluatul alb, tulbure rezultat (această fracțiune conține în principal oxitocină; deoarece oxitocina are un punct izoelectric [pI] de 7,7-în timp ce vasopresina are un pI de 10,9-vasopresina formează ușor ioni pozitivi și este astfel adsorbită pe coloană). De îndată ce nivelul de lichid al extractului scade la suprafața patului de zeolit, se adaugă imediat apă distilată și se continuă colectarea eluatului tulbure până când curgerea încetează. Se ajustează pH-ul eluatului tulbure colectat la 3,5 folosind acid acetic glacial. Încălziți rapid soluția într-o baie de apă la 95 de grade, mențineți această temperatură timp de 3 minute, apoi răciți rapid soluția și puneți-o la frigider peste noapte. În rezumat: Extract de oxitocină [HAc, coloană de zeolit sintetic] → Eluat tulbure [HAc, încălzire] → Soluție separată → Adsorbție și eluție. În ziua următoare, se filtrează soluția refrigerată. La filtrat, se adaugă o suspensie de bentonită 10% în timp ce se agită (adăugând 3 ml de suspensie la 100 ml de filtrat). Continuați să amestecați timp de 1 oră pentru a facilita adsorbția, apoi centrifugeți amestecul. Testați lichidul supernatant folosind o soluție de reactiv acid sulfosalicilic; absența oricărui precipitat indică faptul că procesul de adsorbție este complet. Dacă adsorbția este incompletă, repetați procesul de tratare cu bentonită; ulterior, se combină precipitatele de bentonită obținute din ambele etape de adsorbție. Bentonita este eluată de patru ori folosind acid acetic 1% (cu volume de 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L și, respectiv, 0,8 L). Pentru fiecare eluat, se adaugă *tert*-butiltriclorura odată ce soluția este încălzită la 80 de grade; temperatura este apoi ridicată la 95 de grade, răcită rapid la 25 de grade și fie filtrată, fie centrifugă. Cele patru filtrate rezultate sunt combinate pentru a determina potența și limita vasopresinei. Fluxul procesului este următorul: Soluție refrigerată [Filtrare] → Filtrat [Slam de bentonită] → Adsorbat [1% HAc] → Eluat. Prepararea injectării cu oxitocină:
Soluția de oxitocină testată, care a îndeplinit standardele de calitate, este diluată la o concentrație de 5 U/mL sau 10 U/mL. Apoi este filtrat printr-o pâlnie de sticlă sinterizată No. 4 sau No{. 5, umplut în fiole și sterilizat folosind abur curgător la 100 de grade timp de 30 de minute pentru a obține produsul final. Fluxul procesului este următorul: Soluție de oxitocină (test aprobat) [Filtrare, umplere, sterilizare] → Injecție de oxitocină.
Regenerarea zeolitului sintetic: zeolitul sintetic se spală de două ori cu apă distilată. Apoi, se adaugă 1,5 L de apă (calculat pe baza a 500 g de zeolit) și 150 g de clorură de sodiu, iar amestecul este agitat timp de 2 ore pentru a se spăla și îndepărta vasopresina. Zeolitul este apoi spălat cu apă distilată până când nu rămân ioni de clorură. Se adaugă o cantitate adecvată de apă, iar pH-ul este ajustat la 9 folosind hidroxid de sodiu; amestecul este agitat timp de 30 de minute, după care supernatantul este decantat. Zeolitul este spălat cu apă distilată, pH-ul este ajustat la 5,5-6 folosind acid sulfuric și este spălat din nou cu apă până când este aproape neutru. Apoi este filtrat pentru a elimina excesul de apă și uscat la 105 de grade pentru utilizare ulterioară. Înainte de utilizare, se adaugă o cantitate adecvată de apă, iar pH-ul este ajustat folosind acid acetic glacial în timp ce se agită pentru a permite înmuierea. Prepararea nămolului de bentonită 10%: bentonita și apa sunt amestecate într-un raport de masă-la-volum de 1:10. Amestecul este măcinat timp de aproximativ 1 oră, timp în care se adaugă acid acetic pentru a menține un pH stabil de 3,5. Suspensia rezultată este apoi depozitată într-un frigider pentru utilizare ulterioară. Metoda 2: Sinteza chimică. Mai întâi, amida heptapeptidică (segmentele 3–9) este sintetizată pornind de la esterul benziloxicarbonil-leucinei *p*-nitrofenilic; în continuare, se sintetizează benziloxicarbonil-S-benzilcisteina-tirozin azidă (segmentele 1–2); iar în a treia etapă se sintetizează oxitocina.